外泌体提纯门道太深！回收率超 50%，杂质去除率超 95%，怎么做到
外泌体（Exosome）作为细胞间的「快递小哥」，在疾病诊断、药物递送、免疫调节等领域大放异彩。但研究外泌体的第一步——如何高效、高纯度地富集它们，却让无数科研人头疼。
目前常用的外泌体富集方法主要有：超速离心法（UC）、PEG 沉淀法、尺寸排阻色谱（SEC）、免疫亲和捕获法、磁珠法（Beads-based）。
那么还有什么提纯外泌体的方法呢？一篇发表在外泌体领域顶刊《J Extracell Vesicles》上的文章提出一种膜特异性脂质探针结合磁珠法，分离外泌体的策略，该策略可以捕获 10 µL 外周血浆中的外囊泡（EV），文章中进一步用抗体-寡核苷酸探针标记外泌体表面蛋白，经核酸扩增检测蛋白的表达[1]。
相较于传统超速离心法（只能得到 15～20% 的回收率），膜特异性外泌体富集法可获得 49.6% 的 EV 回收率。
为什么磁珠法越来越火？
磁珠法（Beads-based）的原理是利用磁性颗粒偶联外泌体膜特异性配体，快速分离（He，J.，et al. 2023）。该方法得到的外泌体回收率高（> 50%）、纯度高（杂质去除率 > 95%）、操作快（1～2 小时）且无需超离机，成本低。该方法适合追求效率、纯度、性价比的科研人！
速度碾压超离法——1 小时 vs. 8 小时，早做完早下班！
纯度吊打 PEG 法——WB 条带干净，导师看了直点头。
成本远低于免疫法——不用砸钱买抗体，经费省下来发文章！
磁珠法的「Pro Max」版本助你破解难题
针对传统磁珠法的不足（免疫亲和捕获磁珠，成本昂贵，回收率不足；部分磁珠偶联配体，亲和力与特异性差），水熊科技推出膜特异性外泌体富集试剂盒（ExoMESS™），基于独家 MESS 技术，采用膜特异性高亲和力脂质探针，靶向外泌体的膜结构，通过磁珠法富集，快速获得大量完整的外泌体。实现超高回收率（血浆外泌体 > 50%）、极致纯度（杂质去除率 95%）、超快操作（1～2 小时完成），且适配普通离心机，无需昂贵的设备支持。现开放限量 ExoMESS™ 试用装申领名额，快点击下方图片，体验「又快又纯」的外泌体富集试剂盒！
产品特色与操作流程
膜特异性外泌体富集试剂盒采用独特的分离技术，特异性识别外泌体的膜结构，通过磁珠法富集，快速获得大量完整的外泌体。
实验操作 Tips（以 ExoMESS™ 为例）
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样本预处理：新鲜血浆/细胞上清，4℃ 离心去除细胞碎片。
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磁珠结合：加入 ExoMESS™ 磁珠，轻柔混匀孵育。
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外泌体清洗：PBS 洗涤，获得高纯外泌体。
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下游应用：直接用于 WB、NTA、测序等功能实验。
注意事项：避免反复冻融样本，以免外泌体破裂；磁珠孵育时避免剧烈震荡，防止非特异性吸附。
与其他外泌体富集方法对比结果
膜特异性外泌体富集试剂盒与传统超速离心法、PEG 沉淀法和其他磁珠富集法同步提取血浆外泌体，Western Blot 检测结果：
柱状图统计 Western Blot 的检测结果，阳性标志物 CD9、CD81、TSG101 蛋白表达强度表示外泌体的富集量，阴性标志物 Calnexin 和 GM130 蛋白表达残留量换算成外泌体的纯度。可以看出，PEG 沉淀法外泌体富集量大，但是纯度远低于膜特异性富集；超速离心法富集量及纯度都显著低于膜特异性富集。
通过样品加标回收实验，计算膜特异性外泌体富集法对血浆外泌体富集的效率，如下图所示：
根据实验结果绘制样品加标曲线，计算样品加标（x = i）与不加标（x = 0）时检测到的 CD9 蛋白表达量，即为样本加标的实际检测数值（yi～y0）；根据外泌体标准品曲线，换算（x = i）得到理论加标量（y = z），计算在加入不同倍数外泌体标准品（i）条件下，外泌体的富集效率（n）：n =（yi～y0）/z。
参考文献
