优秀的外泌体是怎样的？够纯还是够量？

研究外泌体的同行们（包括我）一直被外泌体的定量和表征所困扰，什么样的外泌体才是优秀的外泌体呢？

是评估其活性？纯度？蛋白浓度？还是其他什么指标？

或者说我们在做实验时，怎样对外泌体进行定量呢？

这个可以说是进行外泌体实验的第一步，必须确定外泌体的量，才好判断实验变量是否影响外泌体的发生或者确定下游应用实验的给药剂量。

你们是如何进行定量的呢，快来评论区讨论吧！

目前的外泌体定量方法有以下几种，分别是：

l  纳米颗粒跟踪分析

l  纳米流式

l  表面标志物的ELISA定量试剂盒

l  BCA或Bradford蛋白定量试剂盒

注：受认知所限，有没有涵盖的，欢迎在评论区补充。

上述外泌体定量方法中，以BCA蛋白浓度测定应用的最广泛，也最容易得到（也就是可及性很高）。

但是，但是我们分离的外泌体，因获取样本的不一致，每种样本中杂蛋白的含量不尽相同，同时分离方法也不一定相同，这就导致我们很难确定蛋白量与外泌体量的对应关系。

所以，我们这些外泌体研究者就在两难之间不断横跳。

看到很久前（2012年）发表的一篇文章，名为 “How pure are your vesicles?” ，可能可以作为选择哪种定量方式的参考。

外泌体颗粒与蛋白质的比值随着污染蛋白质的增加而降低。(A) 使用蔗糖密度梯度离心从前列腺癌细胞系(LNCAP) 中纯化外泌体，该图绘制了蛋白质浓度 (mg/ml，左轴)和外泌体颗粒浓度 (颗粒/ml，右轴) 与非外泌体蛋白比值的关系。(B) 显示了每个样品中外泌体颗粒与蛋白的比值。

使用外泌体颗粒与蛋白质的比值来量化纯度。 (A)比较了各种样品类型和纯化方法中外泌体颗粒/蛋白质的比值。包括来自标准2D附着培养的上清，简单(差速)超速离心沉淀，沉淀并清洗后沉淀，蔗糖密度梯度离心纯化的外泌体。同时从生物反应器培养系统获得的未纯化培养上清、简单(差速)超速离心沉淀，沉淀并清洗后沉淀，蔗糖密度梯度离心纯化的外泌体。以及新鲜血清和尿液等生物样品进行比较。(B/C) 相同的数据显示为线性图，以更好地突出外泌体颗粒与纯化方法造成的比率差异。从收集的数据来看，接近3E+10的比率被突出显示为高纯度，而那些＜1E+8被武断地认为是不纯的。

总结

虽然文章中给出的一定的参考标准，但有一些多糖或脂质在颗粒数计算时也会被纳入，而蛋白浓度又不会被会计算到。

最好的方法，是用2种不同原理的外泌体纯度表征方法，确定外泌体纯度后，置于用哪种外泌体定量方法都可以的，保持整个研究课题方法统一即可。