ADMSCs-Exo 和ADMSCsAd-Exo 对 DHT 诱导损伤 DPCs 体外修复作用的差异。（a）：在 DHT 作用下以及经ADMSCs-Exo 和 ADMSCsAd-Exo 处理后，观察 DPCs 的形态变化。（b）：对 DHT 作用下以及经ADMSCs-Exo 和 ADMSCsAd-Exo 处理后的DPCs 进行划痕实验分析。（c）：对 DHT 作用下以及经 ADMSCs-Exo 和 ADMSCsAd-Exo 处理后的 DPCs 进行 β- 半乳糖苷酶染色。（d）：测量不同处理条件下 DPCs 的细胞活力水平。（e）：对不同处理条件下 DPCs 划痕生长区域进行统计分析。（f）：确定不同处理条件下 DPCs 中蓝色染色细胞（表示衰老）的比例。（g）：检测不同处理条件下 DPCs 的碱性磷酸酶（ALP）活性水平，以甘油醛 - 3 - 磷酸脱氢酶（GAPDH）作为加载对照。

ADMSCs-Exo 和 ADMSCsAd-Exo 对 DHT 诱导毛囊损伤修复影响的比较分析。（a）：在 DHT 作用下以及经ADMSCs-Exo 和 ADMSCsAd-Exo 处理后，对小鼠 HF 器官进行体外培养。（b）：记录经ADMSCs-Exo 和 ADMSCsAd-Exo 处理后DHT 诱导 HF 损伤的小鼠背皮肤的形态观察结果。（c）：统计分析显示，在特定条件下小鼠 HF 器官中 HF 生长长度存在显著差异。（d）：在不同处理条件下对小鼠背皮肤的 ALP 活性进行比较评估。（e）：对不同处理条件下小鼠背皮肤切片进行苏木精 - 伊红（H&E）染色，标尺 = 100 μm。（f）：对不同处理条件下小鼠背皮肤中 HF 长度进行统计分析。（g）：对不同处理条件下小鼠背皮肤中毛乳头直径进行统计分析。

ADMSCs-Exo 通过抑制TGF-β1/SMAD2 信号通路发挥作用

研究人员检测了 DHT 处理及两种外泌体作用后，毛乳头细胞（DPCs）中 TGF-β1 及其下游靶标蛋白的表达水平，发现 DHT 可促进 TGF-β1 信号通路激活，而 ADMSCs-Exo 能降低相关蛋白表达，抑制该通路激活，ADMCSAd-Exo 则无此效果。在小鼠皮肤组织中也观察到类似结果。下图通过 Western blot 和免疫荧光染色展示了 TGF-β1 和 p-SMAD2 等蛋白的表达情况。从图中可看出，ADMSCs-Exo 处理能显著降低 TGF-β1 和 p-SMAD2 的表达水平及荧光强度，说明其通过抑制TGF-β1/SMAD2 信号通路发挥对 DHT 引起的损伤的修复作用。

ADMSCs-Exo 通过抑制 TGF-β1/SMAD2 信号通路修复 DHT 诱导的 DPCs 和 HF 损伤。（a）：通过西方印迹（Western blot）分析检测在各种条件下 DPCs 中 TGF-β1/SMAD2 信号通路蛋白的表达水平，包括 TGF-β1、SMAD2、磷酸化SMAD2（p-SMAD2）和 SMAD4。（b，d）：采用免疫荧光法检测从小鼠背皮肤提取的毛乳头中 TGF-β1 的表达水平。（c，e）：采用免疫荧光法检测小鼠背皮肤毛乳头及细胞核中 p-SMAD2 的表达水平。

ADMSCs-Exo 通过携带的miR-574-3p 和miR-125a-5p 发挥作用

通过基因芯片技术等分析，发现 ADMSCs-Exo 中miR-574-3p 和 miR-125a-5p 表达量较高，且分别靶向 TGF-β1 和 SMAD2。双荧光素酶报告基因实验、Western blot 等证实了它们与靶基因的结合关系及对蛋白表达的调控作用。此外，研究还发现单独敲低这两种 miRNA 对 ADMSCs-Exo 的疗效影响不大，但同时敲低时，ADMSCs-Exo 对 DHT 损伤 DPCs 的修复能力及对小鼠 AGA 模型的治疗效果显著降低，其抑制 TGF-β1/SMAD2 信号通路的能力也丧失。下图直观展示了 miRNAs 的差异表达情况及筛选过程，通过热图、火山图和韦恩图等呈现了数据。同时敲低 miR-574-3p 和 miR-125a-5p 后，ADMSCs-Exo 对 DPCs 的修复效果及对 TGF-β1/SMAD2 信号通路的调控变化，进一步验证了这两种 miRNA 在 ADMSCs-Exo 发挥治疗作用中的关键地位。

ADMSCs-Exo 和 ADMSCsAd-Exo 中差异 miRNA 含量及靶基因探索。（a）：绘制 ADMSC-Exo 和 ADMSCsAd-Exo 之间 miRNA 差异表达的热图，红色表示基因表达水平高，蓝色表示基因表达水平低。（b）：绘制 ADMSCs-Exo 和 ADMSCsAd-Exo 之间差异 miRNA 的火山图，红色点表示在 ADMSCs-Exo 中表达水平较高的 miRNA，蓝色点表示在 ADMSCsAd-Exo 中表达水平较高的 miRNA（Fold Change > 2 且 P < 0.05）。（c）：绘制差异 miRNA 与数据库交集的韦恩图。紫色区域表示通过 miRNA 芯片检测鉴定的差异 miRNA；红色区域对应 miRPathDB 数据库中的 KEGG 数据集；绿色区域对应 miRPathDB 数据库中的 WikiPathways 数据集。中央重叠区域表示同时存在于所有三个数据集中的差异miRNA。（d）：使用 qRT-PCR 检测 ADMSCs-Exo 中选定差异 miRNA 的相对表达水平，以 U6 作为加载对照。（e）：描绘miR-125a-5p 和 miR-574-3p 靶基因的预测结合位点。（f）：进行双荧光素酶报告基因实验检测 miR-574-3p 与 TGF-β1 的结合。（g）：进行双荧光素酶报告基因实验检测 miR-125a-5p 与 SMAD2 的结合。（h）：对经 miR-574-3p 类似物处理的 DPCs 中 TGF-β1 蛋白表达水平进行WB分析。（i）：对经 miR-125a-5p 类似物处理的 DPCs 中 SMAD2 蛋白表达水平进行WB分析。

ADMSCs-Exo 和ADMSCsKD-Exo（Both）对 DHT 诱导损伤 DPCs 体外修复作用的差异。（a）：观察 DPCs 在 DHT 诱导损伤后经ADMSCs-Exo 和 ADMSCsKD-Exo（Both）处理后的形态反应，标尺 = 200 μm。（b）：测量不同条件下 DPCs 的细胞活力水平。（c）：监测DPCs 在 DHT 诱导损伤后经 ADMSCs-Exo 和 ADMSCsKD-Exo（Both）处理后的划痕生长情况，标尺 = 200 μm。（d）：对不同条件下DPCs 划痕生长区域进行统计分析。（e）：对 DHT 诱导损伤后的 DPCs 进行 β- 半乳糖苷酶染色，标尺 = 200 μm。（f）：确定不同条件下 DPCs 中蓝色染色细胞（衰老细胞）的比例。

ADMSCsKD-Exo（Both）未能恢复 DHT 处理 DPCs 的活性相关蛋白，也无法抑制 TGF-β1 信号通路。（a）：通过西方印迹分析检测与 DPCs 活性相关的蛋白（如 ALP）以及 TGF-β1/SMAD2 信号通路中蛋白（包括 TGF-β1、SMAD2、p-SMAD2 和SMAD4）的表达水平。（b）：柱状图显示 DPCs 中几种蛋白的表达水平。

ADMSCs-Exo 和ADMSCsKD-Exo（Both）对 DHT 诱导 HF 损伤修复作用的差异。（a）：在DHT 作用下以及经 ADMSCs-Exo 和ADMSCsKD-Exo（Both）处理后，对 HF 器官进行体外培养。（b）：对不同条件下 HF 器官中 HF 生长长度进行统计分析。（c）：观察 ADMSCs-Exo 和ADMSCsKD-Exo（Both）处理对 AGA 小鼠模型背皮肤形态的影响。（d）：对不同条件下小鼠背皮肤进行 H&E 染色。（e）：对不同条件下小鼠背皮肤中 HF 长度进行统计分析。（f）：对不同条件下小鼠背皮肤中毛乳头直径进行统计分析。（g）：比较不同条件下小鼠背皮肤的 ALP 活性。

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总结 

本文研究了脂肪间充质/基质细胞外泌体中的两种miRNA（miR-574-3p和miR-125a-5p）在雄激素性脱发治疗中的作用。研究表明，ADMSCs-Exo能够通过抑制TGF-β1/Smad2信号通路，显著改善二氢睾酮（DHT）诱导的毛乳头细胞（DPCs）损伤，并促进毛囊再生。研究的实验设计包括细胞和动物模型，验证了ADMSCs-Exo对DHT诱导的细胞增殖下降、迁移能力减弱以及细胞衰老的修复作用，同时确认了miR-574-3p和miR-125a-5p在外泌体中的高表达以及它们对TGF-β1和SMAD2的靶向作用。研究结果为AGA的病理机制提供了新的见解，并提出了基于ADMSCs-Exo的潜在治疗方法。

未来可以进一步优化外泌体提取技术以提高外泌体的产量和治疗效果。同时，深入研究miRNA在AGA中的作用机制，探索其他miRNA或信号通路在AGA中的潜在作用也将有助于开发出更精确和有效的治疗方法。

此外，开发稳定的靶向递送方法以及克服miRNA复杂的相互作用仍然是实现miRNA临床应用的关键挑战。

该研究为AGA的治疗提供了新的思路和实验依据，具有重要的临床转化潜力。